2. Añadir 5 ml de solución salina.
3. Introducir el contenido del tubo en la boca y realizar un enjuague enérgico, rozando el epitelio con los dientes.
4. Cuidadosamente, verter el líquido con el enjuague al tubo. Al encontrarse en un medio isotónico, no se lisan las células.
5. Rotular un tubo Eppendorf de 1,5 ml.
6. Con la micropipeta 100-1000µl, añadir 250 µl de la solución con
células bucales.
7. Añadir 250 µl de agua ultrapura. Ahora comenzarán a lisarse las
células.
8. Esperar 3 minutos.
9. Centrifugar 2 minutos a 13.000 rpm.
10. Eliminar el sobrenadante.
11. Añadir 500 µl de agua ultrapura.
12. Esperar 3 minutos.
13. Centrifugar 2 minutos a 13.000 rpm.
14. Eliminar el sobrenadante.
15. Añadir 170 µl de Chelex al 5%, después de
resuspender el Chelex en el agitador. El Chelex es un polímero que
actúa como agente quelante, eliminando los iones de Mg2+, necesarios
para la acción de las ADNasas. De este modo, el ADN no se degrada.
16. Vórtex durante 20 s.
17. Calentar 30 min a 56ºC en el baño seco. Agitar en vórtex 10 s. cada
10 min.
18. Calentar 8 min a 95 ºC en el baño seco.
19. Agitar en vórtex 20 s.
20. Centrifugar 3 min a 13.000 rpm
22. Recoger el sobrenadante, con cuidado de no tomar partículas de Chelex, que portarían iones Mg2+.
23 Almacenar a -20 ºC.
