El objetivo general de la asignatura es adquirir la formación y conocimientos necesarios para favorecer en el futuro la integración laboral del estudiante en centros de investigación, industria de la biotecnología o entidades de enseñanzas superiores.

Para ello se trabajaran las siguientes competencias:

- Adquirir los conocimientos necesarios para llevar a cabo las buenas prácticas en un laboratorio.

- Adquirir destreza en la instrumentación básica y los métodos experimentales más utilizados.

- Manejar la literatura científico-técnica de su área y aplicarla a los conocimientos adquiridos.

- Diseñar y/o realizar experimentos, saber describir, cuantificar, analizar y evaluar críticamente los resultados obtenidos y a partir de los mismos obtener las conclusiones.

Temario

BLOQUE I: Artículos y revistas científicas. Búsqueda bibliográfica.

Tema 1: Artículos y revistas científicas: estructura de un manuscrito científico. Cómo se escribe un artículo de investigación. Cómo se publica un artículo de investigación. Tipos de revistas científicas. El factor de impacto. Revistas en formato electrónico.

Tema 2: Búsqueda bibliográfica: Bases de datos de artículos científicos. La base de datos PubMed. Estructura de un registro PubMed. El motor de búsqueda de PubMed. Estrategias de búsqueda. Science

Citation Index.



BLOQUE II: El método científico en la investigación bioquímica. Buenas prácticas en un laboratorio de bioquímica.

Tema 3: El método científico en la investigación bioquímica: planteamiento de una hipótesis. Diseño experimental. Tratamiento de los resultados. Elaboración de conclusiones. Consideraciones éticas.

Tema 4: Buenas prácticas en un laboratorio de bioquímica: Identificación de peligros (físicos, químicos, biológicos y radiológicos). Medidas de seguridad generales y personales. Normativas de seguridad. Comportamiento en situaciones de emergencia.





BLOQUE III: Niveles de experimentación en bioquímica. Sistemas celulares. Fraccionamiento subcelular

Tema 5: Niveles de experimentación en bioquímica: estudios con animales intactos, con órganos, tejidos o células aisladas. Estudios moleculares (estructurales o funcionales). Sistemas celulares. Técnicas para la separación de diferentes tipos celulares (centrifugación, elutriación centrífuga, citometría de flujo). Cultivos celulares. Cuantificación y viabilidad celular. Líneas celulares. Cuantificación y viabilidad celular. El hemocitómetro.

Tema 6: Fraccionamiento subcelular: Métodos para la homogeneización y obtención del extracto crudo.

Centrifugación preparativa (diferencial y en gradiente de densidad). Enzimas marcadores para

identificar los diversos orgánulos celulares. Viabilidad de los orgánulos. Centrifugación analítica.



BLOQUE IV: Tecnología básica en el laboratorio de bioquímica:

Tema 7: Cromatografía. Conceptos básicos y principios generales. Técnicas cromatográficas basadas en la polaridad (cromatografía líquido-sólido, cromatografía gas-líquido, cromatografía líquido-líquido). Técnicas cromatográficas basadas en la carga (cromatografía de intercambio iónico). Técnicas cromatográficas basadas en el tamaño (cromatografía de tamizado molecular). Cromatografía de afinidad.

Tema 8: Técnicas electroforéticas. Conceptos básicos y principios generales. Soportes electroforéticos. Métodos de tinción. Electroforesis en gradiente. Electroforesis en gel de poliacrilamida en presencia de SDS. Isoelectroenfoque. Electroforesis bidimensional. Electroforesis capilar.

Tema 9: Técnicas espectrofotométricas. Conceptos básicos y principios generales. Cromóforos en bioquímica. Coeficiente de absorción molar. La ley de Lambert-Beer. Instrumentación: espectroscopía visible y ultravioleta.

Tema 10: Diseño de un ensayo enzimático. Métodos para la cuantificación de la actividad catalítica.

Determinación experimental de los parámetros cinéticos.

Tema 11: Técnicas radioquímicas. Átomos e isótopos. Desintegración radioactiva. Tipos de emisiones

radioactivas. Unidades de radioactividad. Detección y medida de radioactividad.

Tema 12: Técnicas inmunoquímicas. Anticuerpos. Interacción antígeno-anticuerpo. Anticuerpos policlonales y monoclonales. Marcaje de anticuerpos. Inmunoprecipitación. Inmunoensayos (RIA, IRMA, ELISA).

Tema 13: Técnicas de hibridación. Desnaturalización y renaturalización del ADN. Efectos hipocrómico e hipercrómico. Preparación y marcaje de sondas. Hibridación de ácidos nucleicos. Reacción en cadena de la polimerasa (PCR). RT-PCR. Chips de ADN.

Tema 14: Técnicas de identificación (blotting). Conceptos básicos. Transferencia (blotting). Southern blot. Northern blot. Western-blot. Dot-blot.



Prácticas de aula

La resolución de problemas permitirá profundizar en los conocimientos adquiridos en las clases magistrales:



- Problemas de centrifugación

- Problemas de radioactividad

- Problemas de espectrofotometría

- Problemas sobre reacciones enzimáticas acopladas.

- Diseño de cebadores para PCR



Prácticas de ordenador

Artículos y revistas científicas. Búsquedas bibliográficas en PubMed e ISI-WOK



Prácticas de laboratorio

- Métodos de ruptura celular. Cuantificación de proteína.

- Purificación de cloroplastos mediante centrifugación en gradiente de sacarosa.

- Obtención y preparación de mitocondrias. Determinación de viabilidad mitocondrial.

- Cromatografía de tamizado molecular. Determinación de la masa molecular de una proteína.

- Purificación de lisozima de huevo mediante cromatografía de intercambio iónico.

- Electroforesis de proteínas en gel de poliacrilamida-SDS.

- Electroforesis de ácidos nucleicos en gel de agarosa. Caracterización de ADN plasmídico.



Seminarios

Aprender a realizar presentaciones; para ello se desarrollaran temas relacionados con la asignatura.

Será obligatoria la participación a lo largo del curso en las diferentes modalidades docentes para aprobar la asignatura.

Examen de teoría 45%: respuestas correctas, expresión, argumentación y utilización de la terminología científica. Necesario un mínimo de respuestas correctas del 50%.

Prácticas Laboratorio 30%: asistencia, actitud y limpieza, corrección y claridad del informe; examen, siendo necesario superar el 50% de las cuestiones del mismo.

Prácticas Ordenador 5%: asistencia, actitud y entrega de ejercicios.

Seminario 10%: asistencia, actitud, organización de la información, capacidad de análisis y síntesis, claridad de la exposición y participación en el debate.

Problemas 10%: asistencia, correcta resolución de los problemas planteados durante las prácticas de aula; examen, siendo necesario un mínimo de respuestas corectas del 50%.



* En el caso de presentarse a los exámenes parciales será necesario obtener un mínimo del 70% de respuestas correctas para liberar materia.



*Será obligatoria la participación en las diferentes modalidades docentes a lo largo del curso para poder presentarse a los exámenes de la convocatoria ordinaria. Será necesario un mínimo de respuestas correctas del 50% para aprobar dicho exámen.



- Para el alumnado, sujeto tanto a evaluación continua como final, bastará con no presentarse a la prueba final para que la calificación final de la asignatura sea no presentado o no presentada



Las directrices de evaluación en esta asignatura se basan en los documentos: "Normativa reguladora de la Evaluación del alumnado en las titulaciones oficiales de Grado" y "Protocolo sobre ética académica y prevención de las prácticas deshonestas o fraudulentas en las pruebas de evaluación y en los trabajos académicos en la UPV/EHU" https://www.ehu.eus/es/web/estudiosdegrado-gradukoikasketak/akademia-araudiak

eGela

Bibliografía básica

- Roca, P. y cols. (2003). Bioquímica. Técnicas y Métodos. Editorial Hélice

- García-Segura, J.M. y cols. (2002). Técnicas instrumentales de análisis en Bioquímica. Editorial Síntesis

- Freifelder, D. (2003). Técnicas de Bioquímica y Biología Molecular. Editorial Reverté.

Bibliografía de profundización

- Wilson, K. and Walker, J. (2010). Principles and techniques of biochemistry and molecular biology. 7th edn. Cambridge University Press
- Boyer, R. F. (2009). Biochemistry laboratory: modern theories and techniques. Pearson Education.

Revistas

Investigación y Ciencia