Antropogenética

Práctica L6. Purificación de ADN amplificado.
Con el fin de obtener un ADN sin impurezas para su secuenciación, utilizaremos un kit de purificación sobre los amplificados de la región lactasa.

Los pasos a seguir son los siguientes:

1. Etiquetar un tubo PCR nuevo y añadir 15 µl del amplificado. 2. A continuación, se añaden 75 µl de Buffer PB y se mezclan. Si sólo hemos podido obtener 10 µl de amplificado, el volumen a añadir será de 50 µl. Siempre 5X. Concentrar el ADN 3. Etiquetar un tubo con columna de filtración. Añadir el ADN amplificado junto con el Buffer PB. 4. Centrifugar a temperatura ambiente y 13.000 rpm durante 60 segundos. 5. Eliminar el líquido que ha quedado en el fondo y devolver la columna al mismo tubo.

Lavar el ADN 6. Añadir 750 µl de Buffer PE. 7. Centrifugar a 13.000 rpm durante 60 segundos. 8. Eliminar el líquido que ha quedado en el fondo. 9. Centrifugar de nuevo durante 60 segundos y eliminar el líquido sobrante. 10 Rotular un tubo de 1,5 ml. Introducir en él la columna. Diluir el ADN 11. Añadir 50 µl de Buffer EB al centro de la membrana. 12. Centrifugar a 13.000 rpm durante 60 segundos. 13. Con el fin de aumentar la concentración del ADN, añadir otros 30 µl de Buffer EB al centro de la membrana. Esperar un minuto. 14. Centrifugar a 13.000 rpm durante 60 segundos.

@Jose A. Peña, 2023 Universidad del País Vasco