Utilizar adecuadamente las herramientas metodológicas para el clonaje, expresión y mutación de ácidos nucleicos, así como para la purificación y caracterización de proteínas recombinantes



Comprender las bases moleculares de la transferencia y expresión génica en células eucariotas, y las estrategias experimentales para la obtención de organismos transgénicos

Clonación por PCR del cDNA de una proteína en un vector de clonaje. Mutagénesis dirigida. Amplificación por PCR del cDNA de una proteína a partir de una genoteca de cDNA, diseño de los cebadores. Ensamblaje del DNA recombinante, transformación de células competentes por CaCl2. Identificación de recombinantes fenotípicamente y por hibridación con sonda. Diseño y ejecución de una mutación. Secuenciación de los fragmentos clonados.

Clonaje y expresión del cDNA de la proteína en bacterias. Vectores de expresión Clonaje y expresión del cDNA (secuencias salvaje y mutada). Vector de expresión y regulación de los promotores. Transformación de células competentes por electroporación. Identificación del DNA recombinante por PCR.

Sobreexpresión de las proteínas e identificación de los productos por SDS-PAGE. Purificación de las proteínas expresadas por técnicas cromatográficas.

Praktikak deskribatzen diren protokoloetan agertzen direnak.

La evaluación del alumno se hará mediante una prueba escrita que incluirá preguntas y ejercicios relacionados tanto con las clases magistrales, como con el fundamento teórico de las prácticas de laboratorio y las habilidades adquiridas por los alumnos con las prácticas de ordenador y representará el 70% de la nota final. La evaluación del cuaderno de prácticas sumará otro 20% y la realización de los ejercicios de las prácticas de ordenador el 10% restante.

Las prácticas de laboratorio son obligatorias.



La nota de los cuadernos de laboratorio suma un 20 % de la nota final y se mantendrá para la convocatoria de Junio-Julio.



La no presentación a la prueba fijada en la fecha oficial de exámenes supondrá la renuncia

automática a la convocatoria correspondiente.

No hay un único libro que recoja todo el contenido del curso.

Bibliografía básica

- Principles and techniques of practical Biochemistry (2001). Edited by K. Wilson and J. Walker. Cambridge University Press. Cambridge.

- Gene Biotechnology (2004). Wu, W.; Welsh, M.J.; Kaufman, P.B.; Zhang, H.H. CRC Press. BocaRaton-Florida.

- Principles of Gene Manipulation (2001). Primrose, S.B.; Twyman, R.M. and Old, R.W. Blackwell Science. Oxford

- In Situ Hybridization Protocols (2006). Edited by I.A. Darby and T.D. Hewitson. Methods in Molecular Biology. Humana Press. Totowa, NJ.

Bibliografía de profundización

- Molecular Cloning: a Laboratory Manual (1989) Sambrook, J.; Fritsch, E.F.; Maniatris, T. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harborg, New York.
- DNA cloning 1. A Practical Approach. Core Techniques (1995). Edited by D.M. Glover and B.D. Hames. IRL Press. Oxford University Press. New York.
- DNA cloning 2. Expression Systems (1995). Edited by D.M. Glover and B.D. Hames. IRL Press. Oxford University Press. New York
- In Situ Hybridization Protocols (2006). Edited by I.A. Darby and T.D. Hewitson. Methods in Molecular Biology. Humana Press. Totowa, NJ