Asset Publisher

Evaluación mediante qPCR de la diferenciación de células Jurkat a células Th17.

Doctoral student:
Dimitri Mejía Bonilla (Sobresaliente)
Year:
2025
University:
Master in Microbiology and Health, University of the Basque Country UPV/EHU
Director(s):
Alberto Gamalier Casado Cedano, Lourdes Basabe Desmonts & Idoia Postigo
Description:

La obesidad es actualmente una de las problemáticas asociadas a la salud más extendidas a nivel mundial, se estima que aproximadamente el 24 % de toda la población podría padecer obesidad para el 2035. El ácido palmítico (AP), es el ácido graso saturado más común en la dieta, se encuentra en altas concentraciones en plasma de individuos con obesidad, promoviendo la inflamación. El AP induce la sobreexpresión de receptores linfociticos SLAMF3, potenciando la activación linfocítica y favoreciendo la diferenciación al subtipo celular a Th17 en células de pacientes con obesidad. El factor de transcripción maestro ROR𝛾t, codificado por el gen RORC, es considerado suficiente para inducir la diferenciación de linfocitos T CD4+ naïve en células Th17. En la presente investigación se cuantifica la expresión relativa del gen RORC con el fin de investigar la regulación molecular de la diferenciación Th17 en células Jurkat expuestas a AP.

Para evaluar la expresión del gen RORC, se diseñó una RT-qPCR en dos pasos, con detección basada en SYBR Green, el gen ACTB se empleó como control endógeno. La cuantificación de la expresión relativa de RORC se realizó mediante el método 2−𝛥𝛥𝐶𝑡. Experimentalmente, se empleó palmitato de sodio (PS) en lugar del AP, dado que el PS es un derivado más soluble y estable, lo que facilita su administración en el medio celular.

Por su naturaleza química el PS se disuelve en solución con NaCl 150 mM, lo que aporta estabilidad y limita la formación de complejos lipídicos que afectan su aplicación en el medio. El estudio de la diferenciación en células Jurkat bajo diferentes estímulos, determinó que el PS puede inducir la expresión de RORC en las células previamente activadas con anti-CD3/CD28, y que se podría relacionar a la sobreexpresión de SLAMF3. El uso de PS reproduce de manera parcial algunos de los efectos proinflamatorios asociados a la obesidad, mientras que la expresión relativa de RORC se confirmó como un marcador clave de la activación transcripcional hacia el fenotipo Th17, en células Jurkat.