Descripción y contextualización de la asignatura

Técnicas de cultivo de tejidos animales. Generación de líneas celulares estables. Inmortalización/producción de líneas celulares recombinantes. Obtención/mantenimiento de líneas celulares. Análisis funcionales de células en cultivo.

Convocatoria ordinaria: orientaciones y renuncia

Las condiciones de renuncia a la convocatoria ordinaria se rigen por la Normativa de permanencia del alumnado de los másteres universitarios aprobada por el acuerdo de consejo social de la UPV/EHU el 22 de Julio de 2015. En todo caso habrá que comunicar por escrito a la comisión académica del master la renuncia a la convocatoria, 48 horas antes de la primera prueba de evaluación de la asignatura.

Convocatoria extraordinaria: orientaciones y renuncia

Condiciones de evaluación a discutir con el profesorado.



Las condiciones de renuncia a la convocatoria extraordinaria se rigen por la Normativa de permanencia del alumnado de los másteres universitarios aprobada por el acuerdo de consejo social de la UPV/EHU el 22 de Julio de 2015. En todo caso habrá que comunicar por escrito a la comisión académica del master la renuncia a la convocatoria 15 días antes a la prueba de evaluación extraordinaria.

Temario

Programa teórico



1. Utilización de los cultivos celulares en la investigación médica y biológica.

2. Introducción a los cultivos de células animales. Concepto de cultivo in vitro. Introducción: Historia de las técnicas de cultivo. Generalidades sobre las técnicas de cultivo de células animales Terminología y descripción de los diferentes tipos y sistemas de cultivo celulares. Aplicaciones de los cultivos celulares. Ventajas y desventajas de los cultivos celulares. Las técnicas de cultivo de tejidos como alternativa a la experimentación con animales.

3. El ambiente del cultivo celular. Requerimientos físico-químicos de los cultivos celulares: temperatura, osmolaridad, pH. Soportes y substratos Medios de cultivo. Sueros y complementos. Medios definidos. Técnicas de asepsia. Contaminación: Tipos y Detección. Tratamiento de la contaminación.

4. El laboratorio de cultivos celulares. Incubador. Cabina de flujo. Centrífuga. Instrumentación y metodos analíticos. Microscopio invertido: contraste de fase y de fluorescencia. Microscopía confocal. Microcinematografía y cultivos celulares

5. Origen de los cultivos celulares. Cultivos primarios. Tipos. Métodos de aislamiento. Obtención de tejidos y células para desarrollo in vitro. Disgregación mecánica y enzimática. Purificación de tipos celulares. Líneas celulares. Tipos de líneas celulares establecidas. Origen y manejo de las células. Iniciación de los cultivos.

6. Biología de las células in vitro. Características de las células in vitro. Adhesión celular, citoesqueleto, relación de las células con el medio, metabolismo energético. Diferenciación/desdiferenciación, proliferación, transformación y senescencia.

7. Métodos funcionales aplicados al estudio de cultivos de células animales. Parámetros útiles en cultivos celulares. Número de células Adherencia, tiempo de doblaje y curva de crecimiento.Análisis del ciclo celular.

8. Ensayos de toxicidad in vitro. Concepto 3R. Ensayos de viabilidad y citotoxicidad celular. Validación de los métodos in vitro. Ventajas e inconvenientes.



Programa práctico:

Mantenimiento de líneas celulares estables: siembra, recolecta y subcultivo.

Establecimiento de cultivos primarios.

Preservación y almacenaje de células: congelación de líneas celulares.

Ensayo de cinética de proliferación celular

Ensayos de toxicidad in Vitro

Bibliografía

Materiales de uso obligatorio

Bibliografía básica

Bibliografía básica

Culture of animal cells: a manual of basic technique (5ª ed). Fresney, R.I. Wiley-Liss. 2005

Basic cell culture protocols (3ª ed). Methods in molecular biology. Helgason, C.D. & Miller, C.L. (ed.) Human Press. 2005

Cell Biology protocols. Harris, J.R, Graham, J & Rickwood, D (eds). John Wiley & Sons, Ltd. 2006.

Cell culture essential techniques. Griffihs, B. Essential Techniques series. Wiley, 1997.

Basic cell culture. A practical approach. Davis, J.M. Practical approach series. Oxford UP, 2001.

Cell and tissue culture. Laboratory procedures. Doyle, A. Wiley, 1998.

In vitro alternatives to animal pharmoco-toxicology. Catell, J.V. & Gómez-Lechón, M.J. (eds.). Farmaindustria, Madrid, 1992.